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生物素(維生素 B7 )檢測試劑盒適用于奶粉中添加生物素（維生素 B7）含量的定量分析。 該試劑盒可進(jìn)行 96 次測定。

1、標(biāo)準(zhǔn)品配制?

1） 打開無菌水瓶蓋：沿著箭頭方向向上推開藍(lán)色蓋帽，逆時針拉開鋁塑蓋，取下整個蓋帽，然后打開瓶塞，將瓶塞內(nèi) 側(cè)朝上放置。?

2） 打開生物素標(biāo)準(zhǔn)品瓶蓋，取 x mL 無菌水加入標(biāo)準(zhǔn)品瓶中 （x 值見標(biāo)準(zhǔn)品瓶包裝標(biāo)簽），蓋上瓶蓋，振蕩使標(biāo)準(zhǔn)品 充分溶解，即為標(biāo)準(zhǔn)品工作液。

3） 取6個無菌管（1.5 或 2.0mL），將標(biāo)準(zhǔn)品工作液按照下 表進(jìn)行稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品須現(xiàn)配現(xiàn)用。 標(biāo)準(zhǔn)曲線 μg/100g 無菌水（μL）標(biāo)準(zhǔn)品工作液（μL） 總體積 （μL） 空白：0 500 + 0 = 500 標(biāo)準(zhǔn)品 1:0.08 480 + 20 = 500 標(biāo)準(zhǔn)品 2:0.24 440 + 60 = 500 標(biāo)準(zhǔn)品 3:0.4 400 +100 = 500 標(biāo)準(zhǔn)品 4:0.56 360 + 140 = 500 標(biāo)準(zhǔn)品5:0.72 320+180 =500 *標(biāo)注曲線中已經(jīng)包含樣品 40 倍的提取稀釋倍數(shù)。?

2、檢測培養(yǎng)基的配制?

1） 打開培養(yǎng)基瓶蓋，用無菌鑷子取出干燥劑并丟棄。?

2） 將 10mL 無菌水（取自試劑盒中）加入生物素檢測培養(yǎng)基瓶中，蓋緊瓶蓋，振蕩混勻。?

3） 保證瓶蓋密閉的前體下，95℃水浴加熱 5min，然后快速 冷卻至室溫（低于 30℃）。?

4） 使用 0.22μm 無菌濾膜過濾全部培養(yǎng)基，用 15mL 無菌離 心管收集全部濾液。?

5） 取出凍干菌株，沿著箭頭方向向上推開藍(lán)色蓋帽，逆時針拉開鋁塑蓋，取下整個蓋帽，輕輕打開瓶塞，將瓶塞 內(nèi)側(cè)朝上放置；向菌株瓶內(nèi)加入 1mL 無菌水（取自試劑盒中），用移液槍吹打混勻，取其中的 Y mL（Y 值 見菌株包裝瓶標(biāo)簽）加入過濾后的培養(yǎng)基中，振蕩混勻， 即為檢測菌液（檢測菌液須現(xiàn)配現(xiàn)用）。 注：如果培養(yǎng)基在處理的過程中出現(xiàn)較大體積的損失時， 加入的凍干菌株體積需要做相應(yīng)比例的調(diào)整。為杜絕實驗室污染，菌株瓶中剩余的菌再用瓶塞密封，及時清理出實驗室或者 高壓滅菌處理；制備的檢測菌液如有剩余，也需要及時清理出 實驗室或者高壓滅菌處理。?

3、檢測步驟?

注：加入微孔板中的樣品須為無菌樣品（使用試劑盒中提供的無菌水進(jìn)行稀釋）。?

1） 取出所需數(shù)量的微孔條置于微孔架上，將剩余微孔板條 放回鋁箔袋中密封，2-8℃儲存。?

2） 依次將 140μL 標(biāo)準(zhǔn)品或樣品、140μL 檢測菌液加入微孔中（用標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液潤洗槍頭），然后用粘膠薄膜蓋 好微孔條（揭開粘膠薄膜的保護(hù)層，用手或壓舌板將粘膠 薄膜壓平，使其充分封閉微孔板條）。 注:保證粘膠薄膜和微孔的封閉性，特別注意微孔的邊緣 部分。?

3） 在 37℃培養(yǎng)箱中避光孵育 44-48 小時。?

4） 輕輕來回顛倒混勻微孔板，使菌液充分混勻，然后用一 只手將微孔條固定于微孔架上，另一只手自右上方沿對角揭開粘膠薄膜，靜置 2min 待氣泡全部消去（較難消去 的小氣泡用移液槍吸出）后用酶標(biāo)儀在 610-630nm 或540-550nm 下測量渾濁度。 注：孵育完成后，微孔板可在冰箱中保存的最長時間為48h，然后用酶標(biāo)儀讀數(shù)。