磺胺類 ELISA 檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在酶標板微孔上預(yù)包被磺胺類抗原,樣本中殘留的磺胺類藥物和此抗原競爭磺胺類抗體(抗試劑),同時抗體和酶標二抗(酶標物)相結(jié)合,經(jīng)TMB底物顯色,樣本的吸光值與其殘留物磺胺類藥物的含量呈負相關(guān),與標準曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù),即可得出樣本中殘留物磺胺類藥物的含量。
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,置于室溫(20~25°C)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數(shù)量的微孔板,將不用的微孔板放進原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封,保存于2~8°C。切勿冷凍。
3、洗滌液在使用前也需回溫。
4、編號:將樣本和標準品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。5、加標準品/樣本:加標準品/樣本50μL到對應(yīng)的微孔中,再加入磺胺類的酶標物50μL/孔,再加入磺胺類的抗試劑50μL/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置25°C避光環(huán)境中反應(yīng)30min。
6、洗板:小心揭開蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用洗滌工作液250μL/孔,充分洗滌4~5次,每次間隔10s,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破)。
7、顯色:加入底物液A液50μL/孔,再加底物液B液50μL/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置25°C避光環(huán)境中反應(yīng)15min。
8、測定:加入終止液50μL/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,請在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)),測定每孔OD值(若無酶標儀,則不加終止液用目測法可進行判定)。
結(jié)果判定
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,更便于大量樣本的準確、快速分析(歡迎來電索取)。