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近期，美正生物推出智能水體微生物采集系統(tǒng)，并與行業(yè)標準WS/T799-2022《污水中新型冠狀病毒富集濃縮和核酸檢測方法標準》進行了實驗過程和實驗結果的比較。聚乙二醇沉淀法、鋁鹽混凝沉淀法富集濃縮實驗，按照標準WS/T799-2022中試劑材料、操作步驟執(zhí)行。美正生物智能水體微生物采集系統(tǒng)（以下簡稱“美正超濾法”）按照說明書執(zhí)行。

材料與方法

材料：

智能水體微生物采集儀、高速冷凍離心機、生物安全柜、超濾濃縮管（0.01μm）、過濾袋、移液器及吸頭、超濾濃縮管洗液、MS2過程控制試劑盒（RT－PCR探針法－50°C）。

方法：

預處理：取不同渾濁程度的污水樣本，添加MS2混勻。樣本進行4℃、5000g、30min或倒入過濾袋進行預處理，兩方法均保留上清液，待用。

濃縮富集：

聚乙二醇沉淀法和鋁鹽混凝沉淀法按照標準WS/T799-2022進行富集濃縮，得到水樣濃縮液，于0-4℃條件下保存，并于24h內(nèi)進行核酸提取和熒光定量檢測。

美正超濾法使用智能水體微生物采集系統(tǒng)用超濾濃縮管進行富集，富集后使用4mL超濾濃縮管洗液進行洗脫，得到水樣濃縮液，于0-4℃條件下保存，并于24h內(nèi)進行核酸提取和熒光定量檢測。

實驗過程

聚乙二醇沉淀法的實驗步驟為預離心-二次離心-富集濃縮，需要使用高速冷凍離心機等昂貴設備，且多次離心、操作繁瑣，樣本處理時間為3.5-4h。鋁鹽混凝沉淀法的實驗步驟為預離心-富集濃縮，實驗準備時需要配置多種試劑，需要絡合溶解，樣本處理時間為2h。

美正超濾法實驗步驟為預處理-濃縮-洗脫。高速離心、預處理2種方法均可滿足前處理，且無需使用及配置大量試劑，樣本處理時間為3-5min/100mL。綜上，從操作便捷性及所需時間來看，美正超濾法顯著優(yōu)于聚乙二醇沉淀法、鋁鹽混凝沉淀法。

實驗結果

?注：數(shù)據(jù)來源于實驗室，實際情況可能因樣本或操作等情況導致不同。

聚乙二醇沉淀法取3份35mL污水樣本，低渾濁回收率為5%±4%。鋁鹽混凝沉淀法取100mL樣本污水樣本，低渾濁回收率為16%±8%。美正方法取100mL樣本污水樣本，低渾濁回收率為70%±15%。

從表中可以看出，污水樣本越渾濁，回收率越低，其中聚乙二醇沉淀法高渾濁污水樣本回收率為ND。美正超濾法回收率顯著優(yōu)于聚乙二醇、鋁鹽混凝沉淀法。美正超濾法也可增大采樣體積，進而提高檢出率。

討論

美正智能水體微生物采集系統(tǒng)可滿足污水中新型冠狀病毒富集濃縮。美正智能水體微生物采集儀可滿足大體積樣本的濃縮需求，隨樣本量體積的增加，可提高病毒陽性率的檢出率。同時富集得到的病毒濃度大，更利于測序后續(xù)檢測。

不同病毒富集方法回收率樣本間差異大?？赏ㄟ^添加外源性內(nèi)參，如噬菌體MS2、牛冠狀病毒疫苗、滅活鼠肝炎病毒等，來評估病毒富集回收率。

部分渾濁度較高的污水樣本提取后對反應體系有抑制，可能干擾PCR反應。建議同時對原液樣本、10^-1稀釋樣本進行檢測，根據(jù)實驗室試驗結果，10倍稀釋樣本可有效減少抑制干擾。對于回收率的計算方法，建議參照GB4789.42諾如病毒檢驗中外加擴增控制，進行計算。