2022-07-14 16:35瀏覽量：270
本實驗依據(jù)GB 31658.17-2021《動物性食品中四環(huán)素類、磺胺類和喹諾酮類藥物殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質譜法》，使用PolyPlus HLB-2小柱在ASPE480免疫親和固相萃取系統(tǒng)上運行凈化方法，結合液相色譜-串聯(lián)質譜（LC-MS/MS）進行了豬肉中多獸殘的檢測。
結果表明，在50 μg/kg的四環(huán)素類、磺胺類和喹諾酮類藥物，經(jīng)過Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液、磷酸鹽緩沖溶液提取，使用PolyPlus HLB-2小柱凈化后，ASPE480儀器上運行凈化方法多獸殘的回收率均在60% ~ 110%。
實驗部分
儀器、試劑與材料
主要儀器設備：
美正生物ASPE480免疫親和固相萃取系統(tǒng)、PerkinElmer?QSight液相色譜串聯(lián)質譜儀。
試劑材料：
甲醇、乙腈、乙酸乙酯、甲酸為色譜純；
乙二胺四乙酸二鈉·二水、檸檬酸·一水、磷酸氫二鈉·十二水、磷酸二氫鈉·二水、濃氨水、氫氧化鈉為分析純；
甲醇中32種磺胺類/喹諾酮類化合物混標，P/N：MSVL0415-100M；
四環(huán)素類混合標準品，P/N：MSVL0399-100M。
0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液：取磷酸二氫鈉·二水7.8 g，用水溶解并稀釋至1000 mL。
0.05 mol/L磷酸氫二鈉溶液：取磷酸氫二鈉·十二水17.9 g，用水溶解并稀釋至1000 mL。
磷酸鹽緩沖液：取0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液190 mL，用0.05 mol/L磷酸氫二鈉溶液稀釋至1000 mL。
1 mol/L氫氧化鈉溶液：取氫氧化鈉4 g，用水溶解并稀釋至100 mL。
Mcllvaine-Na2EDTA緩沖溶液：取檸檬酸·一水12.9 g、磷酸氫二鈉·十二水10.9 g、乙二胺四乙酸二鈉·二水39.2 g，加水900 mL，用1 mol/L氫氧化鈉溶液調pH至5.0?±?0.2，用水稀釋至1000 mL。
20%甲醇溶液：取甲醇20 mL，加水80 mL，混勻。
洗脫液：取甲醇150?mL，加乙酸乙酯150?mL、濃氨水6?mL，混勻。
復溶液：取水40 mL，加甲醇5 mL、乙腈5 mL、甲酸0.05 mL，混勻。
PolyPlus HLB-2小柱：200 mg/6 mL，P/N：CSS0147。
樣品制備
樣品提取
稱取試樣2 g，加Mcllvaine-Na2EDTA緩沖液16 mL，渦旋1 min，超聲20 min，－2℃、10000 r/min離心5 min，收集上清液。殘渣中加磷酸鹽緩沖液16 mL，重復提取1次，合并2次提取液，混勻，－2℃、10000 r/min離心5 min，玻璃纖維濾紙過濾，取25mL濾液，備用。
樣品凈化
在ASPE480儀器上，編輯運行方法進行固相萃取小柱的凈化；收集洗脫液，45℃水浴氮氣緩慢吹干。具體方法如下：
圖1. ASPE480儀器凈化方法
基質混合標準工作溶液配制
取高濃度獸藥混合標準溶液，用空白樣品基質溶液稀釋成50 ng/mL的基質混合標準工作溶液。
色譜條件
色譜柱：Kinetex F5，2.6 μm，3.0 × 50 mm ；
流動相：A 相- 2 mM醋酸銨（含0.1%甲酸），B 相-甲醇；
柱??溫：35℃；
進樣量：5 μL；
梯度洗脫見下表。
液相色譜梯度洗脫條件
質譜條件
離子源：ESI+；霧化氣溫度：220℃；電噴霧電壓：4800 V；離子源溫度：300℃；反吹氣溫度：100℃； 質譜接口溫度：250℃；采集方式：多反應監(jiān)測（MRM）。
32種多獸殘質譜參數(shù)
注：本實驗中所有標準物質都以第一組離子對作為定量離子對。
實驗結果
ASPE480儀器檢測豬肉加標回收實驗結果（添加水平50 μg/kg，n = 3）
實驗譜圖
50?ng/mL標準工作溶液色譜圖
50?ng/mL豬肉基質混合標準工作溶液色譜圖
豬肉基質空白色譜圖
50?μg/kg豬肉基質加標色譜圖
結論
本實驗使用ASPE480免疫親和固相萃取系統(tǒng)編輯SPE凈化方法，通過PolyPlus HLB-2小柱結合LC-MS/MS的方法對添加水平為50 μg/kg的豬肉樣品進行了檢測。結果表明，通過使用PolyPlus HLB-2小柱結合ASPE480免疫親和固相萃取系統(tǒng)對豬肉進行凈化，32種獸藥回收率滿足要求且變異系數(shù)小于10%。
附相關產(chǎn)品? ? ? ??
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